De eerste rit van tramlijn 25 was op 3 april 1930. Lijn 25 had toen zijn eindpunt op de Vrijheidslaan bij de Amsteldijk. Op 18 juni 1945 werd het eindpunt verlegd naar het huidige eindpunt op de President Kennedylaan. Al die jaren is de route geweest via de Rijnstraat, Churchilllaan, Ferdinand Bolstraat, Vijzelstraat, Rokin, Damrak naar het Stationsplein. Alleen tijdens de bouw van de Noord-Zuidlijn is de lijn omgelegd via de Ceintuurbaan, van Woustraat en de Weteringschans naar het Weteringcircuit. ook ging in deze periode lijn 25 van het Stationsplein via de Ruyterkade naar de Passagiers Terminal op de Piet Heinkade en wel van 28 mei 2006 tot en met 31 december 2011. De routewijziging voor de Noord-Zuidlijn is de nekslag geworden voor de lijn. Daarom reed lijn 25 op zaterdag 14 december 2013 voor het laatst. Op deze dag reed het twee-asserstel 465+731 als lijn 25. Op deze manier kwam er na  83 jaar een eind aan lijn 25.